Cariotipado

Los hemocultivos a corto plazo, las células de médula ósea y los cultivos de fibroblastos se utilizan con mayor frecuencia para estudiar los cromosomas. La sangre con un anticoagulante que se entrega al laboratorio se centrifuga para sedimentar los eritrocitos, y los leucocitos se incuban en un medio de cultivo durante 2-3 días. Se añade fitohemaglutinina a la muestra de sangre, ya que acelera la aglutinación de los eritrocitos y estimula la división linfocitaria. La fase más adecuada para estudiar los cromosomas es la metafase de la mitosis, por lo que se utiliza la colchicina para detener la división de los linfocitos en esta etapa. Añadir este fármaco al cultivo conduce a un aumento en la proporción de células en metafase, es decir, en la etapa del ciclo celular cuando los cromosomas son más visibles. Cada cromosoma se replica (produce su propia copia) y, después de la tinción apropiada, es visible como dos cromátidas unidas al centrómero, o constricción central. Luego, las células se tratan con una solución hipotónica de cloruro de sodio, se fijan y se tiñen.

Para colorear los cromosomas, se suele utilizar el colorante Romanovsky-Giemsa, acetcarmín al 2% o acetarseína al 2%. Estos colorean los cromosomas de forma completa y uniforme (método rutinario) y pueden utilizarse para detectar anomalías numéricas en los cromosomas humanos.

Para obtener una imagen detallada de la estructura cromosómica e identificar (definir) cromosomas individuales o sus segmentos, se utilizan diversos métodos de tinción diferencial. Los métodos más comunes son la tinción de Giemsa, así como las bandas G y Q. Al examinar la preparación a lo largo del cromosoma, se revelan varias bandas teñidas (heterocromatina) y no teñidas (eucromatina). La naturaleza de la estriación transversal obtenida de esta manera permite identificar cada cromosoma del conjunto, ya que la alternancia de bandas y sus tamaños son estrictamente individuales y constantes para cada par.

Se fotografían las placas metafásicas de cada célula. Se recortan los cromosomas individuales de las fotografías y se pegan en orden en una hoja de papel; esta imagen de cromosomas se denomina cariotipo.

El uso de tinciones adicionales, así como nuevos métodos para obtener preparaciones cromosómicas que permiten estirar los cromosomas en longitud, aumentan significativamente la precisión del diagnóstico citogenético.

Se ha desarrollado una nomenclatura especial para describir el cariotipo humano. El cariotipo normal de un hombre y una mujer se designa como 46, XY y 46, XX, respectivamente. En el síndrome de Down, caracterizado por la presencia de un cromosoma 21 adicional (trisomía 21), el cariotipo de una mujer se describe como 47, XX 21+, y el de un hombre es 47, XY, 21+. En presencia de una anomalía estructural del cromosoma, es necesario indicar el brazo largo o corto alterado: la letra p denota el brazo corto, q denota el brazo largo y t denota la translocación. Así, en el caso de la deleción del brazo corto del cromosoma 5 (síndrome del maullido del gato), el cariotipo femenino se describe como 46, XX, 5p-. La madre de un niño con síndrome de Down por translocación, portadora de la translocación balanceada 14/21, presenta un cariotipo 45, XX, t(14q; 21q). El cromosoma de la translocación se forma por la fusión de los brazos largos de los cromosomas 14 y 21, y se pierden los brazos cortos.

Cada brazo se divide en regiones, que a su vez se dividen en segmentos, ambos designados con números arábigos. El centrómero del cromosoma es el punto de partida para el recuento de regiones y segmentos.

Por lo tanto, se utilizan cuatro etiquetas para la topografía cromosómica: número de cromosoma, símbolo del brazo, número de región y número de segmento dentro de la región. Por ejemplo, la entrada 6p21.3 indica que se trata del cromosoma 6 del sexto par, su brazo corto, región 21, segmento 3. También hay símbolos adicionales, en particular pter (el final del brazo corto) y qter (el final del brazo largo).

El método de investigación citogenético permite detectar deleciones y otros cambios en cromosomas de sólo aproximadamente 1 millón de bases (nucleótidos) de tamaño.

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