Las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical

La sangre cordial actúa como fuente de células madre hematopoyéticas sobre el potencial proliferativo y las capacidades de repoblación de las células hematopoyéticas. Se ha demostrado repetidamente que, en el momento del parto, la sangre del cordón umbilical contiene un número suficientemente grande de células progenitoras hematopoyéticas poco comprometidas. Algunos autores creen que la ventaja de trasplantar células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón es que no hay necesidad de buscar un donante compatible con antígenos HLA. Según ellos, la inmadurez de causas del sistema inmunológico del recién nacido disminución de la actividad funcional de las células inmunocompetentes y, en consecuencia, más baja que en el trasplante de médula ósea, la incidencia de la severa "injerto contra huésped" reacción. En este supervivencia del trasplante de células de la sangre del cordón umbilical es no inferior a células de médula ósea, incluso en el caso de usar un número menor de GSK administrada por 1 kg de peso del paciente. Sin embargo, en nuestra opinión, el número óptimo de preguntas trasplantado células de sangre de cordón necesarias para el injerto eficiente en el cuerpo del receptor, su compatibilidad inmunológica, y una serie de otros aspectos del trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón umbilical requiere un análisis más serio.

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Obtención de células madre hematopoyéticas de sangre del cordón umbilical

El procedimiento para la obtención de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón umbilical requiere su ingesta inmediatamente después del nacimiento y su separación de la placenta, cuando la placenta está en el útero o fuera del útero, así como para la cesárea, pero también fuera del útero. Se muestra que en el caso de una reducción en el tiempo desde el nacimiento hasta la separación del recién nacido de la placenta a 30 segundos, el volumen de sangre del cordón umbilical aumenta en promedio en 25-40 ml. Con un procedimiento posterior, se pierde la misma cantidad de sangre. Se establece que la separación temprana del niño de la postcombustión no implica consecuencias negativas para el recién nacido.

El Instituto de Investigación de Rusia de Hematología y Transfusión de Sangre desarrollado una tecnología eficaz y de bajo costo, tanto para la sangre del cordón en linajes fisiológicos ((70,2 + 25,8) ml) y la cesárea ((73,4 + 25,1) ml). Un método para la separación de la sangre del cordón umbilical con un rendimiento suficientemente alto de células mononucleares y nucleado - (83,1 + 9,6) y (83,4 + 14,1)%, respectivamente. Método mejorado para la crioconservación de sangre del cordón umbilical, que garantiza una alta seguridad de las células mononucleares y CFU-GM - (96,8 + 5,7) y (89,6 + 22,6)%, respectivamente. Se determinó la eficiencia del método de drenaje del muestreo de sangre de cordón con el contenedor "Kompoplast-300" (Rusia). Valla autores de sangre de cordón a cabo inmediatamente después del nacimiento y su separación de la placenta, en cuanto a la colocación de la placenta en el útero o fuera del útero. Antes de la punción de la vena umbilical cordón umbilical una vez tratada con 5% de tintura de yodo, y luego dos veces - 70% de alcohol etílico. La sangre fluyó a través de los tubos de conexión al recipiente de forma espontánea. La duración de la valla no tomó más de 10 minutos. 66 recogidos método de volumen de drenaje muestras de sangre umbilical promediaron (72 + 28) ml, y el número de leucocitos en la muestra promediaron completo - (1,1 + 0,6) x x 107. El análisis de la sangre del cordón umbilical de la esterilidad (contaminación bacteriana, VIH-1 los virus de hepatitis B y C, sífilis y la infección por citomegalovirus) en una sola muestra se identificaron anticuerpos IgG a la hepatitis C. En otro estudio una vez que la placenta después superficie fetal nacimiento fue colocado en un marco especial hacia abajo, el cable fue tratado con 5% de sodio yodo y 75% de etilo º alcohol. Las venas del cordón umbilical se drenaron con una aguja del sistema de transfusión (G16). La sangre se escurrió en el contenedor de forma espontánea. El volumen de sangre tomado de esta manera promedió (55 + 25) ml. El documento de G. Kogler et al (1996) cable tomado sangre manera cerrada y obtenido grandes volúmenes de sangre - en promedio (79 + 26) ml. Los autores señalan que entre 574 cable de muestras de sangre contienen aproximadamente 7% de menos de 40 ml de sangre, lo que no permite utilizarlos para trasplante. K. Isoyama et al (1996), teniendo la sangre del cordón por exfusion activo utilizando jeringas, recibió un promedio de 69,1 ml de sangre (volumen de sangre de cordón varió de 15 a 135 ml). Finalmente, los colaboradores A. Abdel-Mageed PI (1997) de cateterismo punovinnoy vena se obtuvieron en un promedio de 94 ml de sangre de cordón (de 56 a 143 ml).

Para reducir el riesgo de infección iatrogénica y la contaminación por secreciones maternas desarrollados de recogida de sangre de sistema cerrado basado en el sistema transfuzioinoy ampliamente utilizado Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (EE.UU.), que contiene 62,5 ml de CPDA (citrato-fosfato-dextrosa con adenina) como anticoagulante La tecnología de obtención del material es de primordial importancia para la preparación de una muestra cualitativa con respecto al volumen, contenido y pureza de la suspensión celular. De los métodos existentes de recogida de sangre de cordón, kotoryeuslovno clasificado en preferencia sleduetotdavat sistema cerrado, semiabierto y abierto en primer lugar, como en un sistema cerrado reduce significativamente el riesgo de contaminación microbiana del material, así como la contaminación de la suspensión celular de la célula madre.

A. Nagler y coautores (1998) realizaron un análisis comparativo de la eficacia de los tres sistemas de muestreo de sangre del cordón umbilical. En la primera variante, el procedimiento se realizó en un sistema cerrado mediante la extracción de sangre directamente en el recipiente. En la segunda variante, la sangre del cordón umbilical se obtuvo por el método de la extracción activa de sangre de las jeringas1 con un posterior lavado de las venas de la placenta y el drenaje simultáneo de la sangre en el recipiente (método abierto). En la tercera variante, la sangre se extrajo en un sistema semiabierto mediante la extracción activa con jeringas y el lavado a través de la arteria del cordón umbilical con exufusión simultánea en el recipiente. En la primera versión, los autores recibieron sangre de cordón umbilical en el volumen (76.4 + 32.1) ml con un recuento de leucocitos (10.5 + 3.6) x 10 ⁶ por 1 ml de sangre. En la segunda variante, los índices correspondientes fueron (174.4 + 42.8) ml y (8.8 + 3.4) x 10 ⁶ / ml; en el tercero - (173.7 + 41.3) ml y (9.3 + 3.8) x 10 ⁶ / ml. La infección más frecuente de muestras de sangre del cordón umbilical se observó cuando se usa un sistema abierto. Se establece una correlación directa entre la masa de placenta y el volumen de sangre extraída: al aumentar la masa de placenta, la cantidad de sangre recogida aumenta.

Después del muestreo de la sangre del cordón umbilical, sigue el paso de separación: aislamiento de las células mononucleares y purificación de la suspensión celular de los eritrocitos. En las condiciones experimentales, las células nucleadas se aislaron por el método de su sedimentación con metilcelulosa durante la lisis de los eritrocitos de amonio por cloruro. Sin embargo, para fines clínicos, no se debe usar metilcelulosa, ya que la pérdida de células madre hematopoyéticas alcanza el 50-90%. Lisar las células rojas de la sangre en relación con grandes volúmenes de la solución de trabajo en la clínica también apenas llevado a cabo, aunque el porcentaje de separación de esta manera las células nucleadas con el fenotipo de células CD34 +, y células progenitoras funciones CFU-GM y CFU-GEMM considerablemente mayor. Se ha informado sobre un nuevo agente para el aislamiento de células mononucleares en la solución de densidad de compra de gradiente de densidad (BDS72). Esta sustancia tiene los siguientes parámetros fisiológicos: pH - 7.4, osmolalidad - 280 mosm / kg, densidad - 1.0720 g / ml. Según los autores, con su ayuda es posible aislar hasta el 100% de las células positivas para CD34 y eliminar el 98% de los glóbulos rojos. Sin embargo, la clínica aún no aplica BDS72.

Los métodos de separación probados células nucleadas de la sangre del cordón umbilical se utiliza típicamente una solución de HES 10% o solución de gelatina al 3%. Eficiencia de la precipitación de los eritrocitos y el aislamiento de las células nucleadas en ambos casos es aproximadamente igual. Sin embargo, en el caso de su uso como un agente de gelatina sedimentación posible obtener un número algo mayor de CFU-GM, que cuando se usa HES. Se supone que la diferencia en la eficiencia de recuperación de CFU-GM de velocidad desigual debido a la deposición de las fracciones individuales o moléculas de HES células nucleadas capacidad absorbidos sobre los receptores de la superficie celular hematopoyéticas y por lo tanto bloquean su sensibilidad a los factores estimulantes de colonias, que se utilizan cuando el cultivo de CFU-GM en vitro. Sin embargo, tanto sedimentador bien puede ser adecuado para el aislamiento de células nucleadas en la creación de grandes bancos de sangre del cordón umbilical.

Los métodos de separación y crioconservación de la sangre del cordón umbilical en principio no difieren de los utilizados en el trabajo con células madre hematopoyéticas de sangre periférica y médula ósea de donantes adultos. Pero al preparar una gran cantidad de muestras de sangre del cordón umbilical para sus bancos, los métodos de separación deben ser, antes que nada, de bajo costo. Por lo tanto, ahora, desafortunadamente, para las necesidades clínicas ya utilizadas se usan métodos rutinarios de aislamiento y criopreservación de células sanguíneas del cordón umbilical, y los métodos más efectivos pero financieramente efectivos siguen siendo la suerte de los experimentadores.

En general, los criterios para estimar el número de células hematopoyéticas y los requisitos para el estudio de muestras de sangre de cordón umbilical se establecieron para identificar agentes infecciosos. Con el fin de asegurar el trasplante de células sanguíneas del cordón hematopoyético, todas las muestras de sangre deben examinarse principalmente para detectar infecciones hematógenas y enfermedades genéticas. Algunos autores recomiendan métodos especiales adicionales de estudio de la sangre del cordón umbilical para el propósito de diagnóstico de enfermedades genéticas tales como la talasemia y la anemia falciforme, la deficiencia de adenosina desaminasa, agammaglobulinemia de Bruton, enfermedad Harlera y apostador.

Según las recomendaciones Ticheli L. Et al (1998), en cada muestra de sangre del cordón umbilical es necesario para determinar el número de células nucleadas, células SB34-positivas y CFU-GM, llevar a HLA-tipificación para determinar el grupo sanguíneo ABO y Rh sus miembros. Además, la siembra se lleva a pruebas bacteriológicas, serológicas para la infección por VIH y CMV, HBsAg, hepatitis C, HTLY-I y HTLV-II (leucemia de células T, humano), la sífilis, toxoplasmosis. Es obligatoria una reacción en cadena de la polimerasa contra el citomegalovirus y la infección por el VIH.

El mismo procedimiento para obtener sangre de cordón se debe llevar a cabo en estricta conformidad con los principios de la bioética médica. Antes del inicio de la extracción de sangre es necesario obtener el consentimiento de la mujer embarazada para su implementación. La entrevista preliminar con una mujer embarazada para obtener el consentimiento informado para realizar todas las manipulaciones, desde la extracción de sangre hasta la finalización de la documentación, se lleva a cabo solo por personal médico. En cualquier caso inadmisible de realizar cualquiera de estos procedimientos por personal con biológica, química, farmacéutica y otra educación no médico, en vista de la violación de las normas establecidas de la bioética y los derechos humanos. Para las pruebas positivas para HBsAg portador, los anticuerpos para el agente causal de la hepatitis C, la sangre del cordón VIH y la sífilis no se toman, y las muestras de sangre recogidas ya se desecha y destruidos. Cabe señalar que el transporte de infecciones latentes en los recién nacidos es mucho más raro que en los adultos, por lo tanto la probabilidad de transferencia y el desarrollo de complicaciones infecciosas de infusiones hematopoyéticos de células de sangre de cordón hematógena es significativamente menor que en el caso de trasplante de médula ósea de donantes adultos.

Un punto importante en la aplicación de sangre del cordón umbilical en la clínica es la evaluación del trasplante, que se basa en la determinación del número de células madre hematopoyéticas en la muestra de sangre del cordón umbilical y las dosis de células necesarias para el trasplante. Los estándares para la cantidad óptima de células sanguíneas del cordón umbilical requeridas para el trasplante aún no se han desarrollado. No existe un punto de vista generalmente aceptado ni siquiera en parámetros rutinarios como el número de células positivas para CD34 y CFU-GM. Algunos autores evaluaron el potencial de las células hematopoyéticas mediante el análisis de los cultivos a largo plazo con la determinación del contenido de unidades formadoras de colonias comunes a granulocitos, eritrocitos, monocitos y megacariocitos - CFU-GEMM.

Sin embargo, en entornos clínicos, la evaluación estándar del trasplante de sangre del cordón generalmente incluye solo la determinación del número de células nucleadas o mononucleares.

Almacenamiento de células madre hematopoyéticas de sangre del cordón umbilical

Existen algunos problemas en la tecnología de almacenamiento de células sanguíneas del cordón hematopoyético. Cuando la criopreservación de células madre hematopoyéticas con el fin de lograr su modo de congelación óptima debe minimizar la cantidad de sangre del cordón umbilical y las células rojas de la sangre previamente retiradas para evitar la hemólisis y el riesgo de reacción incompatibilidad de antígenos de eritrocitos (ABO, Rh). Para estos fines, son adecuados diversos métodos para aislar células nucleadas. En el método más ampliamente utilizado de la separación de las células nucleadas en un gradiente de densidad basado en Ficoll con una densidad de 1,077 g / ml, o percolación con una densidad de 1,080 g / ml principios de los 90 del siglo pasado. Separación de Sangre de Cordón por gradiente de densidad permite seleccionar células predominantemente mononucleares pero conduce a pérdidas considerables de células progenitoras hematopoyéticas - hasta un 30-50%.

La eficiencia de sedimentación del hidroxietil almidón en el proceso de aislamiento de células sanguíneas del cordón umbilical se estima de diferentes maneras. Algunos autores indican una baja calidad de separación utilizando este método, mientras que otros investigadores, por el contrario, entre todos los métodos posibles prefieren asignar sangre de cordón HSC con precisión usando una solución al 6% de hidroxietil almidón. Esto resalta la alta eficiencia de sedimentación de las células hematopoyéticas, que, según algunos datos, alcanza del 84% al 90%.

Los partidarios de otro punto de vista piensan que casi todos los procesos de fraccionamiento implican células grandes pérdidas yadrosoderzhashih y ofrecen para hacer que la separación por centrifugación, la separación de la sangre del cordón umbilical en 3 fracciones: eritrocitos, leucocitos y anillo plasma. La separación de las células de esta manera, los inventores han encontrado que el contenido de las células mononucleares de células progenitoras hematopoyéticas tempranas y células con CD34 + inmunofenotipo en última instancia fue, respectivamente, 90, 88 y 100% del nivel original. Cantidades similares de crecimiento purificado en este método de células de la sangre del cordón umbilical obtenidas por otros investigadores: después de la sedimentación nucleadas asigna 92%, 98% - mononuclear, 96% - las células CD34-positivas y 106% de las unidades formadoras de colonias.

A fines de la década de 1990, la gelatina fue ampliamente utilizada como agente de sedimentación. En la práctica clínica, con la ayuda de la gelatina, las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical se han aislado desde 1994. Cuando se usa una solución al 3% de gelatina, la eficacia del aislamiento de las células nucleadas alcanza el 88-94%. El uso generalizado de la gelatina en el desarrollo del banco de sangre del cordón ha confirmado sus ventajas sobre otros agentes de sedimentación. Análisis comparativo de todos los métodos anteriores de aislamiento de células nucleadas en términos de su uso secuencial en cada una de las muestras de sangre de cordón prueba mostró que las células mononucleares sedimentador de salida óptimos con el fenotipo CD34 + / CD45 +, así como por el número de CFU-GM y CFU-GEMM es 3% solución de gelatina Se demostró que es significativamente métodos menos eficaces usando gradiente de densidad de Ficoll, y el uso de metil celulosa y almidón de hidroxietilo en el que la pérdida de células hematopoyéticas alcanzó el 60%.

La expansión del volumen de trasplante de células madre de la sangre del cordón umbilical está asociada no solo al desarrollo de métodos para su producción, sino también al almacenamiento. Hay muchos problemas directamente relacionados con la preparación de la sangre del cordón umbilical para el almacenamiento a largo plazo y la elección de la tecnología óptima de crioconservación para sus muestras. Entre ellos se encuentran los problemas de la conveniencia de realizar procedimientos de separación, el uso de varios medios de crioconservación y el uso de métodos para preparar células descongeladas para trasplante. El transporte de muestras nativas de sangre de cordón a menudo se lleva a cabo desde regiones alejadas de los centros hematológicos. En relación con esto, surge el problema de los períodos permisibles para el almacenamiento de sangre del cordón umbilical desde el momento de su recepción hasta el comienzo de la crioconservación, lo cual es de particular importancia en el desarrollo de bancos de sangre del cordón umbilical.

El estudio de la actividad funcional de las células hematopoyéticas de sangre de cordón después de almacenamiento a largo plazo (hasta 12 años) en nitrógeno líquido reveló que aproximadamente el 95% de las células hematopoyéticas durante este tiempo no pierden su alta capacidad de proliferación. El papel Yurasova S. Et al (1997) demostraron que el cable de la sangre almacenada a temperatura ambiente (22 ° C) o a 4 ° C durante 24 y 48 horas no reduce sustancialmente la viabilidad de las células hematopoyéticas que el nivel inicial es de manera adecuada 92 y 88%. Sin embargo, si el tiempo de almacenamiento se extiende a tres días, la cantidad de células nucleadas viables en la sangre del cordón se reduce significativamente. Al mismo tiempo, durante otros estudios, se encontró que cuando se almacena durante 2-3 días a una temperatura de 22 o 4 ° C, la viabilidad de los granulocitos maduros, en lugar de las células hematopoyéticas, afecta principalmente.

La viabilidad de las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón puede verse afectada negativamente por los componentes del sistema para su recolección. Análisis del efecto de diferentes anticoagulantes, cuyo mecanismo de acción es debido a la unión de iones de calcio (ACD, EDTA, XAPD-1) para las células progenitoras hematopoyéticas en las condiciones de almacenamiento de sangre de cordón de 24 a 72 horas reveló su impacto negativo en la viabilidad de células nucleadas. A este respecto, los autores recomiendan el uso de PBS (solución tampón de fosfato) con la adición de heparina nativo sin conservante a una concentración de 20 U / ml, que, en su opinión, hace que sea posible aumentar la duración del almacenamiento no fraccionada sangre del cordón hasta 72 horas y guarda la actividad funcional de unidades formadoras de colonias. Sin embargo, en el estudio de la conservación de CFU-GM y CFU-G demostrado que el tiempo de almacenamiento de sangre del cordón umbilical antes de la crioconservación no debe exceder de nueve horas. Obviamente, en este caso debe actuar el principio de que si hay datos contradictorios deben usar el mínimo recomendado la vida de almacenamiento de sangre del cordón umbilical y comienzan a células aisladas de congelación programables lo más rápido posible.

Cuando se congelan las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical, generalmente se usa una solución al 10% de DMSO como crioprotector. Sin embargo, además del efecto crioprotector expresado, el dimetilsulfóxido en esta concentración tiene un efecto citotóxico directo, incluso bajo la condición de exposición mínima a las células formadoras de sangre de cordón umbilical. Para reducir el efecto citotóxico del DMSO, se aplica una temperatura de exposición cero, un aumento en la velocidad de todas las manipulaciones y un lavado repetido después de descongelar las muestras de cordón umbilical.

El Instituto de Hematología y Transfusiología de la Academia de Ciencias Médicas de Ucrania ha estado desarrollando una dirección científica desde 1995, cuyo objetivo es estudiar la sangre del cordón umbilical como una fuente alternativa de células hemopoyéticas madre. En particular, se han desarrollado nuevas tecnologías para la criopreservación a baja temperatura de células hemopoyéticas de sangre de cordón no fraccionada y fraccionada. Como un crioprotector, se usa polivinilpirrolidona médica de bajo peso molecular. El método de crioconservación de la sangre del cordón umbilical no fraccionado se basa en la tecnología original de pre-preparación de las células para la congelación y la técnica de tratamiento especial de la suspensión celular inmediatamente antes del trasplante.

Uno de los factores más importantes que afectan el nivel de actividad funcional de las células madre hemopoyéticas criopreservadas es la velocidad de enfriamiento de la suspensión celular, especialmente durante la fase de cristalización. Un enfoque de software para resolver el problema de la velocidad y el tiempo de congelación proporciona grandes oportunidades para crear métodos simples y altamente efectivos de criopreservación, sin lavar la suspensión celular de los crioprotectores antes del trasplante.

Las etapas de congelación y descongelación inmediata son más peligrosas para la viabilidad de las células durante su preparación. Cuando se congelan las células hematopoyéticas, una parte significativa de ellas puede destruirse en el momento de la transición del medio intercelular de la fase líquida a la fase sólida: cristalización. Para reducir el porcentaje de muerte celular, se utilizan crioprotectores, cuyos mecanismos de acción y efectividad crioprotectora han sido adecuadamente cubiertos en la literatura científica.

A prometedores Técnicas dirección optimización de criopreservación de la médula ósea y las células de sangre de cordón umbilical es combinar en la misma solución a bajas concentraciones de crioprotectores con varios mecanismos de acción diferentes, por ejemplo, que actúa sobre el nivel intracelular de DMSO y almidón de hidroxietilo o albúmina que posee efecto envolvente extracelular.

Para la criopreservación de las células de sangre de cordón se utilizan tradicionalmente solución de DMSO 20% que se movía de forma permanente mecánicamente en un baño de hielo, se vertió lentamente en la suspensión de células para lograr igual (1: 1) la relación en volumen de suspensión celular y el crioprotector. La concentración final de dimetilsulfóxido es 10%. La suspensión celular se enfría luego en un criostato de software con una velocidad de HS / min a -40 ° C, después de lo cual la velocidad de enfriamiento se aumenta a 10 ° C / min. Después de alcanzar -100 ° C, el contenedor con la suspensión celular se coloca en nitrógeno líquido (-196 ° C). Con este método de crioconservación, la seguridad de las células mononucleares funcionalmente activas después de la descongelación alcanza el 85% del nivel inicial.

Las modificaciones de los métodos de crioconservación tienen como objetivo reducir la concentración de DMSO mediante la adición de hidroxietil almidón (las concentraciones finales de dimetilsulfóxido e hidroxietil almidón son 5% y 6%, respectivamente). La alta eficacia de esta combinación de crioprotectores se observa cuando la suspensión de células mieloides se congela, con no menos citoprotección que con una única solución al 10% de dimetilsulfóxido. El número de células nucleadas viables alcanzó el 96,7% del nivel de referencia, y su actividad funcional, estimada por el número de CFU-GM, fue del 81,8%.

Cuando se utiliza solución de sulfóxido de dimetilo a concentraciones que van de 5 a 10% en combinación con 4% de almidón de hidroxietilo (concentración final) encontrado que la preservación de las células CD34-positivas en estos rangos dimetilsulfóxido prácticamente sin cambios. Al mismo tiempo en condiciones de reducir la concentración de DMSO 5-2,5% se observa muerte masiva de células de sangre de cordón - el número de unidades de células viables se reduce desde 85,4 hasta 12,2%. Otros autores también concluyeron que era 5 y 10% de solución de sulfóxido de dimetilo (en la realización de derechos de autor - en combinación con suero autólogo) con la máxima eficiencia proporcionar citoprotección durante la criopreservación de HSC sangre de cordón. Además, secuencialmente alta seguridad congelado y descongelado de células está marcado en el caso de combinación de 5 o 10% DMSO solución de almidón de hidroxietilo 4%, particularmente a una velocidad de enfriamiento controlada de TOS / min. En otro papel solución crioprotectora que consta de tres ingredientes ya utilizado - DMSO, albúmina humana purificada y medio RPMI en una proporción de 1: 4: 5, que se añadió a la suspensión celular hasta un máximo de relaciones de igual volumen (concentración final de DMSO fue del 5%). Después de descongelar en un baño de agua a una temperatura de + 4 ° C, la seguridad de la CFU-GM excedió el 94%.

Algunos autores sugieren utilizar sangre de cordón no fraccionada para la criopreservación, ya que se pierden cantidades significativas de células hematopoyéticas durante la eliminación de los glóbulos rojos. En esta realización, se usa una solución al 10% de dimetilsulfóxido para proteger las células mononucleares de los efectos perjudiciales de la crio-cristalización. La congelación se lleva a cabo a una tasa de enfriamiento constante de HS / min a -80 ° C, después de lo cual la suspensión de células sanguíneas del cordón umbilical se sumerge en nitrógeno líquido. Con este método de congelación, tiene lugar una lisis parcial de los eritrocitos, por lo tanto, las muestras de sangre no requieren fraccionamiento. Después de la descongelación, la suspensión celular se lava de hemoglobina libre y dimetilsulfóxido en una solución de albúmina humana o en el suero autólogo del paciente y se usa para trasplante.

La preservación de células progenitoras hematopoyéticas después de la descongelación de sangre de cordón no fraccionada es de hecho mayor que el fraccionado, pero en conexión con krioustoychivostyu de las células rojas de la sangre puede causar problemas graves como resultado de Transfusión de post-transfusión de glóbulos rojos ABO-incompatible. Además, el volumen de sangre no fraccionada almacenada aumenta significativamente. Desde un punto de vista clínico, todavía es preferible crioconservar previamente aislado y purificado a partir de otras fracciones celulares de células sanguíneas del cordón hematopoyético.

En particular, un método es la criopreservación de las células de sangre de cordón fraccionados que permite eliminar los eritrocitos en la preparación para la congelación, que usa una solución al 6% de almidón de hidroxietilo en la solución de la composición plazmozameshchath "Stabizol". Después de la descongelación, la suspensión celular así obtenida está lista para uso clínico sin manipulación adicional.

Por lo tanto, en la actualidad, existen muchas formas bastante efectivas de crioconservación de la sangre del cordón umbilical. La diferencia principal es que las muestras de sangre se congelan no fraccionadas o se someten a separación en fracciones celulares durante la etapa de preparación y se recolectan células nucleadas sin una mezcla de eritrocitos.

Trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre del cordón umbilical

A finales de los años 80 y principios de los 90, en el siglo pasado, se descubrió que la sangre del cordón umbilical que alimenta al feto durante el embarazo se caracteriza por un alto contenido de células madre hematopoyéticas. La relativa simplicidad de obtener células sanguíneas del cordón umbilical y la ausencia de problemas éticos evidentes promovió el uso de células madre de la sangre del cordón umbilical en la medicina práctica. El primer trasplante exitoso de sangre del cordón umbilical a un niño con anemia de Fanconi sirvió como punto de partida para expandir los volúmenes de trasplante de células madre del cordón umbilical y crear un sistema para su provisión bancaria. En el sistema global de bancos de sangre del cordón umbilical, el más grande es el Centro de Nueva York para Placental Blood, que se encuentra en el balance de los Institutos Nacionales de Salud. El número de muestras de sangre del cordón almacenadas en este banco se acerca a 20 LLC. El número de receptores (principalmente niños) también está creciendo y se ha llevado a cabo un trasplante exitoso. Según el Departamento de Salud de los EE. UU., El período sin recaídas de la vida postrasplante de los receptores de sangre de cordón HSC ya ha excedido los 10 años.

Esto no es sorprendente, ya que numerosos estudios sobre el potencial hematopoyético de la sangre del cordón umbilical han demostrado que la cantidad y calidad de las células madre más tempranas no sólo no es inferior a un adulto de médula ósea humana, sino también por algunas medidas excederlo. Un potencial de proliferación mayor de las células madre de sangre de cordón causada características de señalización celular de desarrollo, la presencia de receptores en las HSCs a factores de crecimiento específicos, la capacidad de las células de sangre de cordón a autocrina producción de factores de crecimiento, el gran tamaño y longitud de los telómeros.

Por lo tanto, las características genómicas y fenotípicas de las células sanguíneas del cordón umbilical que forman la sangre del tallo predeterminan el injerto cualitativo de un trasplante con un alto potencial para la restauración de la hematopoyesis del donante en el organismo receptor.

Ventajas de las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical

Entre los beneficios reales de la utilización de células madre del cordón umbilical hematopoyéticas para trasplante sobre otras fuentes de células hematopoyéticas cabe señalar casi cero riesgo para la salud del donante (si no es considerado como una placenta tal), al tiempo que elimina la necesidad de anestesia general. El uso de la sangre del cordón umbilical amplía las posibilidades de trasplante celular debido al trasplante parcialmente compatible en el sistema HLA (incompatibilidad de uno a tres antígenos). La técnica de almacenamiento a largo plazo de las células hematopoyéticas de sangre de cordón en un estado congelado, lo que aumenta la probabilidad de obtener rara de tipo HLA y reduce el tiempo de búsqueda trasplante alogénico HLA compatible. Al mismo tiempo, el riesgo de desarrollar algunas infecciones latentes transmitidas por la ruta de transmisión se reduce significativamente. Además, existe una forma económica de seguro de vida biológico en relación con la posibilidad de utilizar células de cordón umbilical para el autotrasplante.

Sin embargo, porque los pequeños volúmenes de sangre que se pueden recoger de la placenta (un promedio de no más de 100 ml) a un primer plano el problema de obtener la máxima cantidad posible de sangre de la vena del cordón umbilical en estricto cumplimiento de las condiciones de mínimo riesgo de contaminación bacteriana de muestras derivadas de sangre de cordón umbilical.

Células hematopoyéticas primitivas a partir de la sangre del cordón umbilical se identifican generalmente por la presencia en su CD34 glikofosfoproteina superficie, y sobre la base de sus propiedades funcionales mediante el examen de la formación de ensayo o colonia clonogénico in vitro. Análisis comparativo mostró que en la sangre del cordón y la médula ósea contenido máximo de células mononucleares positivas CD34 en la fracción son, respectivamente, 1,6 y 5,0%, el nivel máximo de unidades formadoras de colonias en una subpoblación de células CD34 + - 80 y 25%, la eficiencia total de la clonación de células CD34 + -Cells - 88 y 58%, la colonia máximo células con alto potencial proliferativo (HPP-CFC en -populyatsii CD34 +) que forma - 50 y 6,5%. Debe añadirse que la eficiencia de clonación de CD34 + células CD38 y la capacidad de responder a la estimulación de citoquinas también mayor en las células madre hematopoyéticas de sangre de cordón.

Combinación de antígenos fenotípicas Thy-1, CD34 y CD45RA confirma la alta capacidad proliferativa de las células hematopoyéticas de sangre de cordón, y la expresión de los tres antígenos en la superficie de las células de sangre de cordón indica que pertenecen a la célula madre. Además, se ha establecido que la sangre del cordón umbilical contiene células con un fenotipo CD34 + que no tienen marcadores de diferenciación lineal. El nivel en la sangre del cordón umbilical de las subpoblaciones celulares con el perfil fenotípico de CD34 + / Lin es aproximadamente el 1% del número total de células CD34 positivas. Células progenitoras hematopoyéticas dan lugar a la sangre del cordón como un líneas de células linfoides, y un número de la diferenciación de células pluripotentes lineal mieloide, que también indica que pertenecen a las células madre.

Como ya se mencionó, las diferencias esenciales entre la médula ósea y la sangre del cordón son la cantidad de células hematopoyéticas utilizadas para el trasplante, obtenidas con un procedimiento. Cuando la pérdida de trasplante de médula ósea de la masa celular en el proceso de separación, la criopreservación, descongelación y pruebas son permisibles en el intervalo de 40-50%, las células de sangre de cordón tal pérdida es muy significativo, ya que cuando se utiliza el número insuficiente de trasplante de HSC puede ser insostenible. Según G. Kogler et al (1998), para el trasplante de células en el peso corporal del receptor de 10 kg de trasplante de potencial (total de las muestras de sangre de cordón recogidos - 2098) puede ser todas las muestras de sangre de cordón, el peso corporal de 35 kg - 67%, y sólo El 25% de las muestras pueden proporcionar un trasplante eficaz en pacientes con un peso corporal de 50-70 kg. Esta situación clínica indica la necesidad de optimizar y mejorar la efectividad de los métodos existentes de muestreo, reproducción y almacenamiento de células sanguíneas del cordón umbilical. Por lo tanto, las cuestiones de la estandarización de los métodos de muestreo, ensayo, separación y criopreservación de sangre del cordón es ahora ampliamente discutidas en la literatura para la creación de bancos de sangre, su uso en la clínica, así como el establecimiento de las condiciones y términos de almacenamiento de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón.

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El uso de células madre hematopoyéticas de sangre del cordón umbilical en medicina

Por lo general, se pueden aislar hasta 10 ⁶ células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical , raramente más. En relación con esto, hasta el día de hoy, sigue pendiente la cuestión de la suficiencia de tantas células sanguíneas del cordón hematopoyético para restaurar la hematopoyesis del receptor adulto. Las opiniones sobre este tema fueron divididas. Algunos investigadores creen que esta cantidad es suficiente para los niños de trasplante, pero demasiado pequeño para trasplantar humano adulto, para el que la administración es óptima (7-10) x 10 ⁶ células CD34-positivas por 1 kg de peso corporal - promedio de 7 × 10 ⁸ por trasplante. A partir de estos cálculos, se deduce que una muestra de cordón umbilical contiene 700 veces menos células madre hematopoyéticas de las que se requieren para un trasplante a un paciente adulto. Sin embargo, dicha evaluación cuantitativa se realiza por analogía con el número de células transfundidas en la médula ósea e ignora por completo las características ontogenéticas de la hematopoyesis.

En particular, se ignora el hecho de un mayor potencial proliferativo de las células madre hematopoyéticas de la sangre del cordón umbilical en comparación con las células precursoras hematopoyéticas de la médula ósea. Los resultados de los estudios del potencial de formación de colonias in vitro sugieren que una dosis de sangre del cordón umbilical puede proporcionar una reconstitución de la hematopoyesis del receptor adulto. Por otro lado, no debemos olvidar que el número de células madre hematopoyéticas disminuye incluso en el proceso del desarrollo embrionario: el contenido de las células CD34-positivas en la sangre del cordón umbilical se reduce linealmente 5 veces en un período de 20 semanas (de sangre para el estudio se obtuvo en caso de terminación prematura del embarazo) a las 40 semanas de gestación (el período de nacimientos fisiológicos), que se acompaña de un aumento paralelo y permanente en la expresión de marcadores de citodiferenciación lineal.

Debido a la falta de un enfoque estandarizado para la cuantificación de células progenitoras en muestras de sangre de cordón umbilical, continúa la controversia sobre la dosis óptima de células madre de sangre del cordón hematopoyético. Algunos investigadores creen que a medida que los criterios de selección de las muestras de sangre de cordón se puede utilizar el número de células nucleadas y células mononucleares, volver a calcular el peso corporal del receptor, es decir, su dosis. Algunos autores creen que el umbral cuantitativo mínimo de células CD34 +, incluso para llevar a cabo el trasplante autólogo de HSC, es de 2 x 10 ⁶ / kg. El aumento de la dosis de las células hematopoyéticas a 5 x 10 ⁶ células / kg (total de 2,5) ya proporciona un más adecuado para el período post-trasplante temprano, reduce la incidencia de complicaciones infecciosas y acorta el periodo de tratamiento preventivo con antibióticos.

De acuerdo con E. Gluckman et al (1998) en hematología para el trasplante con éxito de células de sangre de cordón umbilical es la introducción de al menos 3,7 × 10 ⁷ células nucleadas por 1 kg de peso corporal del receptor. Con una disminución en la dosis de células madre hematopoyéticas a 1 x ¹⁰⁷ y menos células nucleadas por 1 kg de peso corporal, el riesgo de falla del injerto y la recurrencia del cáncer aumenta bruscamente. Se debe reconocer que aún no se conoce el número mínimo de células progenitoras necesarias para la recuperación rápida de la hemopoyesis después del alotrasplante de GSG. Teóricamente esto puede lograrse usando una sola célula, pero en el hueso clínica trasplante de médula rápido y estable injerto transfusión garantizado al menos (1-3) x 10 ⁸ células nucleadas por 1 kg de peso corporal del paciente.

Un estudio detallado reciente para determinar la cantidad óptima de HSC en oncohematología incluyó la observación de pacientes de tres grupos aislados según el contenido de células CD34 positivas en el material de trasplante. Los pacientes del primer grupo recibieron (3-5) x 10 ⁶ células / kg. La dosis de HSC en pacientes del segundo grupo fue (5-10) x 10 ⁶ células / kg, y los pacientes del tercer grupo recibieron un trasplante de más de 10 x 10 ⁶ células CD34 + / kg. Los mejores resultados se observaron en el grupo de receptores que recibieron un trasplante con un número de células positivas para CD34 igual a (3-5) x 10 ⁶ / kg. Con un aumento en la dosis de células trasplantadas por encima de 5 × 10 ⁶ / kg, no se identificaron beneficios estadísticamente significativos. Al mismo tiempo, un contenido de HSC muy grande en el trasplante (> 10 x 10 ⁶ / kg) se asocia con la reinfusión de un número significativo de células tumorales residuales, lo que conduce a una recaída de la enfermedad. No hubo una relación directa entre la cantidad de células progenitoras alogénicas trasplantadas y el desarrollo de la reacción "injerto contra huésped".

La experiencia mundial acumulada de trasplante de sangre de cordón HSC confirma su alto potencial de repoblación. La tasa de injerto del trasplante de sangre del cordón umbilical se correlaciona con la cantidad de células nucleadas introducidas. Los mejores resultados se observan con un trasplante de 3 × 10 ⁷ / kg, mientras que para la médula ósea esta dosis es de 2 × 10 ⁸ / kg. Según los datos de los centros de coordinación, a finales de 2000 se realizaron en el mundo 1200 trasplantes de células sanguíneas del cordón umbilical, principalmente de familiares de donantes (83%). Obviamente, la sangre del cordón se debe considerar como una alternativa a la médula ósea para el trasplante a pacientes con hemoblastosis.

Sin embargo, la naturaleza neonatal Cordova fuente de tejido hematopoyético fomentar debido a la presencia de las características funcionales de su GCW. Sin embargo, sólo la experiencia clínica puede dar una respuesta a la cuestión de la adecuación de una muestra de sangre del cordón umbilical para la reconstitución hematopoyética adulta del destinatario con aplasia de la hematopoyesis. El trasplante de células de sangre de cordón se usa en el tratamiento de muchas enfermedades de la naturaleza del tumor y no tumor: leucemias y síndromes mielodisplásicos, linfoma no Hodgkin, y neuroblastoma, anemia aplásica, anemia de Fanconi congénita y ventilador Diamond Negro, deficiencia de adhesión de leucocitos, síndrome Barr, síndrome Gunther enfermedad Harlera, talasemia .

La atención cercana y la investigación separada merecen los aspectos inmunológicos del trasplante de células formadoras de sangre de cordón umbilical. Se muestra que en el caso de trasplante de células madre de sangre de cordón de donantes con resultados incompletos de trasplante de HLA compatibles son bastante satisfactorios, que, según los autores, indicando una sangre del cordón inmunoreactividad inferior a la médula ósea.

Un estudio detallado de la composición celular de la sangre del cordón umbilical mostró características tanto de espectro fenotípico de las células efectoras del sistema inmune y su actividad funcional, lo que permite considerar la sangre del cordón como fuente de HSCs con riesgo relativamente bajo de reacción "injerto contra huésped". Entre los signos de inmadurez funcional de las células sanguíneas del cordón umbilical inmunocompetentes, se debe notar un desequilibrio en la producción de citoquinas y una disminución en la sensibilidad a la regulación de la respuesta inmune de las citoquinas. La inhibición resultante de la actividad de linfocitos citotóxicos se considera un factor que contribuye a la formación de tolerancia inmunológica al tejido hemopoyético trasplantado. En la población de linfocitos del cordón umbilical, a diferencia de la sangre periférica y la médula ósea de donantes adultos, predominan los linfocitos inmaduros inactivos y las células supresoras. Esto indica una menor disponibilidad de linfocitos T de sangre del cordón umbilical a la respuesta inmune. Una característica importante de la población de monocitos de las células sanguíneas del cordón umbilical es el bajo contenido de células presentadoras de antígenos funcionalmente completas y activas.

Por un lado, un bajo grado de madurez de las células efectoras del sistema inmune en las lecturas de sangre de cordón se extiende a su uso en la clínica, puesto que estas características permiten la reducción en la intensidad del conflicto inmunológico entre las células donantes y receptores. Pero, por otro lado, sabemos de la existencia de una correlación entre el grado de reacción "injerto contra huésped" y el efecto antitumoral de trasplante, es decir, el efecto del desarrollo de "injerto contra leucemia". En relación con este estudio de citotoxicidad anti-tumor de células de sangre de cordón se llevó a cabo. Los resultados indican que, a pesar de la respuesta inmune muy debilitado de las células de sangre de cordón a la estimulación antigénica, activados en primer lugar son las células asesinas naturales y células killeropodobnymi que están involucrados activamente en los mecanismos de aplicación de la citotoxicidad anti-tumor. Además, en las subpoblaciones de linfocitos de sangre de cordón se encontraron con el fenotipo CD16 + CD56 + y CD16 "TCRa / p +. Se supone que estas células están en una forma activada implementan reacción" injerto contra leucemia".

En el Instituto de Oncología, Academia de Ciencias Médicas de Ucrania se administraron células hematopoyéticas criopreservadas de sangre del cordón umbilical a pacientes de cáncer con hipoplasia persistente de hematopoyesis debido a la quimioterapia y la radioterapia. En estos pacientes, el trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón restaura eficazmente la opresión de la sangre, como se evidencia por elevación persistente de elementos formados maduros en la sangre periférica, así como un aumento en los indicadores de caracterizar el estado de la inmunidad celular y humoral. La estabilidad del efecto de repoblación después del trasplante de células productoras de sangre de cordón umbilical permite la continuación de la radiación y la quimioterapia sin interrumpir el curso del tratamiento. Hay evidencia de pacientes con cáncer de la sangre del cordón de células madre mayor de aloinjertos eficiencia: el riesgo anual de recurrencia de un tumor en su uso fue de 25% frente a 40% en pacientes con un gen de médula ósea alogénico trasplantado.

El mecanismo de acción de las células madre de sangre de cordón criopreservados debe ser considerada como el resultado de una estimulación humoral de los receptores de la hematopoyesis causadas por la capacidad única de las células neonatales a autocrinos producción de factores de crecimiento hematopoyéticos, así como una consecuencia de que el injerto temporal de las células del donante (como una confirmación - un aumento significativo en el contenido de sangre periférica de hemoglobina fetal destinatario 7-15 º día después de la transfusión en comparación con la línea base). Ausencia en los receptores de reacciones después de la transfusión de sangre de cordón - resultado de su tolerancia relativa de las células inmunes, así como el criterio de confianza la utilidad de material biológico crioconservado.

Las células progenitoras de linfocitos T de sangre de cordón asesino capaz de activación bajo la influencia de la estimulación de citoquinas exógenas que se utiliza para desarrollar nuevos ex vivo y en métodos in vivo de inducción de células citotóxicas linfoides anti-tumorales para la inmunoterapia trasplante subsiguiente. Además, la "inmadurez" del genoma de células de cordón umbilical inmunocompetentes les permite ser utilizadas para mejorar la actividad antitumoral mediante métodos de modelado molecular.

Hoy, la sangre del cordón umbilical ha encontrado una amplia aplicación principalmente en hematología pediátrica. En los niños con leucemia aguda alotrasplante de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón en comparación con los aloinjertos de médula ósea, reduce significativamente la incidencia de reacción "injerto contra huésped". Sin embargo, se observó durante un largo período de neutropenia y trombocitopenia, y por desgracia, un nivel más alto de la mortalidad de 100 días después del trasplante. Un período de recuperación de los granulocitos de la sangre periférica y las plaquetas más largo podría ser debido a la diferenciación insuficiente de las subpoblaciones individuales de células positivas CD34 de sangre de cordón umbilical, como se evidencia por el bajo nivel de absorción de rodamina radiactivos y baja expresión de antígenos de CD38 en su superficie.

Al mismo tiempo, el trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre umbilical de los pacientes adultos, realizados debido a la falta tanto de un donante de médula ósea no relacionado compatible, así como oportunidades para movilizar autólogo HSC mostró la supervivencia libre de recaída anual alta en pacientes menores de 30 años (73%) . La expansión del rango de edad de los receptores (18-46 años) dio como resultado una disminución en la tasa de supervivencia al 53%.

El análisis cuantitativo de las células con la sangre de la médula ósea y el cable de fenotipo CD34 + mostró mayor (3,5 veces) su contenido en la médula ósea, pero la sangre del cordón umbilical mostró un predominio significativo de células con perfil fenotípico de células CD34 + HLA-DR .Izvestno, marcadores chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR proliferan más activo que las células con el inmunofenotipo CD34 + HLA-DR +, como se confirma en estudios experimentales del crecimiento de cultivo a largo plazo de las células hematopoyéticas in vitro. Progenitores de células primitivas con el fenotipo CD34 + CD38 contenida en la sangre del cordón y la médula ósea, pero las células de sangre de cordón umbilical con el marcador establecido CD34 + CD38 tienen una mayor actividad clonogénico de las células hematopoyéticas del mismo fenotipo, aisladas de adultos donantes de médula ósea. Además, las células de sangre de cordón umbilical con CD34 + CD38 inmunofenotipo proliferarán en respuesta a la estimulación con citocinas (IL-3, IL-6, G-CSF) y reproducirse 7 veces más colonias en los cultivos a largo plazo que las células de médula ósea.

Bancos de células madre de sangre del cordón umbilical

Para el adecuado desarrollo del nuevo campo de la medicina práctica - el trasplante de células madre del cordón umbilical, así como para llevar a cabo trasplantes de células madre de médula ósea hematopoyéticas, debe tener una amplia red de bancos de sangre, que ya están establecidas en los EE.UU. Y Europa. Las redes intraestatales de bancos de sangre del cordón umbilical están unidas por la Asociación de Bancos Netcord. La viabilidad de establecer una asociación internacional de bancos de sangre de cordón se determina por el hecho de que para llevar a cabo trasplantes no relacionados necesitan un gran número de muestras de sangre del cordón umbilical mecanografiado, lo que permite elegir el donante HLA idéntico. Solo el establecimiento de un sistema de bancos con el almacenamiento de muestras de sangre de diferentes tipos de HLA en ellos puede realmente resolver el problema de encontrar el donante necesario. La organización de dicho sistema de bancos de sangre del cordón umbilical requiere el desarrollo preliminar de normas éticas y legales, que actualmente se están discutiendo a nivel internacional.

Para crear bancos de sangre del cordón umbilical en Ucrania, es necesario elaborar una serie de disposiciones y documentos.

En primer lugar, se trata de estandarizar los métodos de muestreo, fraccionamiento y congelación de la sangre del cordón umbilical. Es necesario regular las reglas para tomar muestras de sangre del cordón umbilical en los hospitales de maternidad de acuerdo con los requisitos de la ética médica, para determinar la cantidad mínima de sangre del cordón umbilical que asegura un trasplante exitoso. Se deberá compararse y estandarización de los diferentes criterios de evaluación de la calidad y el número de células progenitoras hematopoyéticas, así como métodos HLA-de escritura y los métodos de diagnóstico de enfermedades genéticas e infecciosas que pueden ser transmitidas por la infusión de células de sangre de cordón umbilical establece criterios generales de selección de donantes sanos. También vale la pena discutir la creación de instalaciones de almacenamiento separadas para el suero, las células y el ADN derivado de la sangre del cordón umbilical.

Absolutamente necesario organizar la red de datos de sangre de cordón para la relación con los registros de donantes de médula ósea. Para más desarrollo de trasplante de células que desarrollar protocolos específicos que comparan resultados del trasplante de sangre del cordón umbilical y la médula ósea de parientes con HLA idéntico, y los donantes no relacionados. Al tratar con los problemas éticos y legales del uso clínico de células de sangre de cordón puede ayudar a estandarizar la documentación, incluyendo el consentimiento informado de los padres, así como la notificación de la madre o parientes del niño identificado por factores genéticos y / o enfermedades infecciosas.

La condición determinante para el desarrollo del trasplante de células en Ucrania será la adopción del Programa Nacional para la donación de células madre y el desarrollo de la cooperación internacional con otros países a través de la Asociación Mundial de médula ósea del donante (WMDA), el programa de médula ósea del donante Nacional de Estados Unidos (NMDP) y otros registros.

La generalización de la historia todavía por debajo del trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón umbilical, observamos que la primera suposición de la posibilidad de aplicación clínica de la sangre del cordón umbilical, realizado a principios de los 70, fueron confirmados en los 80 años los resultados de los estudios experimentales en animales, y en 1988 Ya se realizó el primer trasplante mundial de células formadoras de sangre de cordón umbilical a un hombre, después de lo cual se creó la red mundial de bancos de sangre del cordón umbilical. Después de 10 años, el número de pacientes con células hematopoyéticas trasplantadas, umbilical más cerca de la sangre del cordón a 800. Entre ellos se encontraban pacientes con diversas enfermedades tumorales (leucemia, linfoma, tumores sólidos) y no tumoral (inmunodeficiencia congénita, anemia, enfermedades asociadas con trastornos metabólicos) la naturaleza.

En la sangre del cordón umbilical, el contenido de los progenitores celulares primitivos y comprometidos es mayor que en la sangre periférica de un adulto. Por el número de unidades formadoras de colonias de granulocitos y macrófagos y su potencial proliferativo, la sangre del cordón umbilical excede significativamente la sangre periférica de los adultos, incluso después de la administración de factores de crecimiento. En cultivos celulares a largo plazo in vitro, hubo una mayor actividad proliferativa y viabilidad de las células sanguíneas del cordón umbilical que las células de la médula ósea. Los momentos críticos en el trasplante de células madre de sangre de cordón umbilical son células hematopoyéticas nucleadas número y potenciales, la presencia de la infección por citomegalovirus, donante de HLA compatible y el destinatario, el peso corporal y la edad del paciente.

Sin embargo, el trasplante de células madre de sangre del cordón umbilical debe considerarse una alternativa al trasplante de médula ósea para tratar enfermedades graves de la sangre, especialmente en niños. Los problemas clínicos de trasplante de células de sangre de cordón umbilical resuelven gradualmente - hay técnicas de muestreo ya bastante eficiente, la separación y crioconservación de células de sangre de cordón, siempre que las condiciones para la formación de bancos de sangre de cordón, los métodos de prueba se mejoran las células nucleadas. Ideal para la separación con una adquisición a gran escala de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón umbilical cuando se creen bancos debe considerarse una solución de gelatina al 3% y una solución al 6% de hidroxietil almidón.

Perehrestenko P. Et al (2001) señalan con razón que el trasplante de células madre de sangre de cordón debe tomar su lugar que le corresponde en las complejas medidas terapéuticas para vencer la depresión de la hematopoyesis de diversos orígenes, como la sangre del cordón GSK difieren en un número de ventajas significativas, entre las que importante es la relativa facilidad de la cosecha, sin riesgo para el donante, baja contaminación de las células neonatales por virus y un costo relativamente bajo de trasplante. Algunos autores sugieren que el trasplante de células de sangre de cordón umbilical con menos frecuencia que las células de médula ósea se acompaña de complicaciones asociadas con la reacción de "injerto contra huésped", que se debe, en su opinión, una expresión débil en las células de sangre de cordón de antígenos HLA-DR y su inmadurez. Sin embargo, la principal población de células nucleadas de la sangre del cordón umbilical son linfocitos T (células SDZ-positiva), cuyo contenido es aproximadamente 50%, que es 20% menos que en la sangre periférica de un adulto, pero las diferencias fenotípicas de las subpoblaciones de células T de estos las fuentes son insignificantes

Entre los factores que afectan directamente a la supervivencia del trasplante de células madre de sangre de cordón umbilical, debemos tener en cuenta la edad de los pacientes (los mejores resultados se observan en los receptores hasta la edad de 5 años), el diagnóstico precoz de la enfermedad y una forma de leucemia (eficiencia es significativamente mayor en la leucemia aguda). De gran importancia es la dosis de células sanguíneas del cordón umbilical nucleadas, así como su compatibilidad HLA con el receptor. No es ningún análisis de accidentes de la eficacia clínica de trasplante de sangre del cordón GSK en Oncología y Hematología muestra los mejores resultados del tratamiento usando los trasplantes relacionados: un año de supervivencia libre de enfermedad en este caso alcanza el 63%, mientras que el trasplante no relacionado - sólo el 29%.

Por lo tanto, la presencia de un gran número de células madre en la sangre del cordón y células madre hematopoyéticas neonatales alta capacidad repopulyatsionnaya los hacen adecuados para el trasplante alogénico en pacientes con neoplasias hematológicas. Sin embargo, tenga en cuenta que la recapitulación de la hematopoyesis después del trasplante de células madre hematopoyéticas de sangre de cordón "se estira en el tiempo": la restauración de contenido en neutrófilos de sangre periférica por lo general se produce hacia el final de la sexta semana, y el fenómeno de la trombocitopenia desaparecer, por lo general después de 6 meses. Además, las células hematopoyéticas inmaduras de la sangre del cordón umbilical no excluye conflicto inmunológica: curso grave de "injerto contra huésped" aguda y crónica reacción observada, respectivamente, en 23 y 25% de los receptores. Las recaídas de leucemia aguda por el final del primer año después del trasplante de células de sangre de cordón umbilical se encuentran en 26% de los casos.

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